sábado, 30 de julio de 2011

Microscopia



Organización general:

Partes ópticas:
·         Ocular
·         Tubo
·         Objetivos

Partes mecánicas:
·         Brazo o estativo
·         Revólver
·         Platina
·         Pinzas
·         Tornillo macrométrico
·         Tornillo micrométrico
·         Tornillo del condensador
·         Pie

Partes relativas a la luz:
·         Lámpara
·         Diafragma
  • Condensador

 
El  microscopio óptico, existen microscopios que permiten ver muestras mucho más pequeñas, los que han sido desarrollados desde la 2ª mitad del siglo XX.
Los microscopios electrónicos utilizan haces de electrones en lugar de luz. Los electrones se enfocan mediante campos mag­néticos en lugar de lentes. Algunos tipos de microscopios elec­trónicos pueden resolver estructuras de unos cuantos nanómetros (la mil millonésima parte de un metro). Los microscopios elec­trónicos de transmisión (MET) pasan electrones a través de una muestra delgada y pueden mostrar estructuras dimi­nutas dentro de las células, incluyendo a los organelos y membranas plasmáticas.
Los microscopios electrónicos de barrido­(MEB) rebotan electrones sobre las muestras que han sido cu­biertas con metales y proporcionan imágenes tridimensionales. Los MEB pueden utilizarse para ver estructuras en un rango de tamaño que va desde insectos completos hasta células y aún or­ganelos.




a. Ameba, organismo formado por una sola célula (unicelular), que mide cerca de 50 micrones




 b. Células del interior de una trompa de Falopio. Cada uno de los “pelitos” que se ven mide 10 micrones de largo y se llaman cilios




c. Espermio acercándose a un óvulo. El óvulo humano es una célula que mide  poco más de 100 micrones





d. Núcleo de una célula animal, de alrededor de 5 micrones de diámetro







e. Corte transversal de una hoja






f. Poros de salida de glándulas gástricas. Por una de ellas sale un chorro de jugo gástrico






g. Corteza cerebral humana, que tiene un espesor de unos pocos milímetros






h. Glóbulo blanco deformado al atravesar por un capilar sanguíneo. Este capilar tiene un diámetro de unos 10 micrones






i. Capilar sanguíneo cortado transversalmente, por el que asoma un glóbulo rojo, célula que mide 7 micrones de diámetro




El microscopio es un instrumento que requiere de una serie de recomendaciones para obtener observaciones de calidad

El siguiente es un listado de instrucciones y recomendaciones que deberás aplicar durante el laboratorio de microscopía.
·         No debe moverse del lugar asignado. En caso de ser indispensable, tomarlo del estativo o brazo
·         Al comenzar a trabajar debe estar con el objetivo más corto sobre la posición de la muestra. En caso contrario, es necesario bajar al máximo la platina y usar el revolver para dejar los objetivos en la posición correcta.
·         Si el microscopio que te correspondió es binocular (posee dos oculares, como los prismáticos), deberás ajustarlos con el tornillo que tienen al centro, según la posición de tus ojos.
·         El botón de encendido se ubica en el pie del microscopio. Te darás cuenta que está encendido al ver la luz que atraviesa el orificio de la platina, donde se ubicará la muestra.
·         Hay dos tipos de muestras: fijas o vivas. Las fijas son preparaciones que vienen “listas para ver”. Constan de un portaobjeto, la muestra fijada con resina y un cubreobjeto que aisla totalmente la muestra. Las muestras vivas se preparan momentos antes de ser vistas. Puede tratarse de organismos efectivamente vivos (por ejemplo, protozoos), muestras de tejidos o alguna estructura que estuvo viva recientemente.
·         Para preparar una muestra vida, se dispone un portaobjeto limpio sobre el mesón de trabajo. Luego se agrega la muestra. Si la muestra es sólida, debe ir en disuelta en una pequeña gotita de agua. Si la muestra es líquida, se puede poner directamente sobre el portaobjeto. A continuación, se dispone el cubreobjeto con ayuda de una aguja de disección, evitando la formación de burbujas.



·         La muestra se dispone sobre la platina por un costado. Se abren las pinzas y se desliza la muestra sobre la platina hasta dejarla fija con las pinzas. Luego se suelta la pinza, dejando la muestra fija.
·         Con los tornillos para movimiento se mueve la muestra hasta ubicarla directamente sobre el rayo de luz que proviene desde el condensador
·         Recién entonces se toma el tornillo macrométrico para acerca ligeramente la platina a la muestra
·         Solo cuando se ha hecho todo lo anterior, mirar por el ocular. Enfocar la imagen con mucha suavidad, utilizando el tornillo macrométrico. Cuando se obtenga una imagen mas o menos nítida, hacer uso del tornillo micrométrico para mejorarla aún mas.
·         Tras hacer las observaciones correspondientes con el aumento menor, cambiar al aumento siguiente mediante el revolver, sin bajar la platina.
·         Volver a usar solo el tornillo micrométrico para enfocar con el 2º aumento.
·         Repetir el procedimiento para el aumento siguiente.
·         No utilizar el 4º objetivo de 100 aumentos (100X) a menos que el profesor lo indique y aplique aceite de inmersión a la muestra.
·         Tener presente que el aumento total se calcula multiplicando el aumento del objetivo por el del ocular (que normalmente es de 10 veces)


Metabolismo Celular




FASES DEL METABOLISMO

         CATABOLISMO

            Reacciones destructivas.

            Degradación de moléculas en componentes más pequeños.

            Se obtiene energía ATP.

            Se producen moléculas sencillas de desecho.

         ANABOLISMO

            Reacciones constructivas.

            Precursores sencillos se convierten en moléculas complejas.

            Se gasta energía ATP.




ADENOSIN TRI FOSFATO (ATP)

         Presente en todas las células
 durante períodos breves.

         Conserva energía de la que se puede disponer fácilmente.



ENZIMAS

         Tipo especial de proteínas

          Catalizadores biológicos



Máxima eficacia: condiciones óptimas pH y temperatura

MODO DE ACCION:

Formando un complejo enzima – sustrato:





RESPIRACION CELULAR

RESPIRACION AEROBIA

          Utilizada por la mayor parte de eucariontes y procariontes.

          Requiere de la presencia de oxígeno.

          Los nutrientes se catabolizan a dióxido de carbono y agua.

          La vía de reacción global con la glucosa como sustrato se resume:

  C6H6O6 + 6O2  + 6 H 2O            

                                    6CO2 + 12 H2O + ATP  

          Genera 38 moles de ATP bruto, como se gastan dos moles durante el proceso, la célula queda con 36  moles de ATP neto.
 

GLUCÓLISIS

         Se lleva a cabo en el citoplasma celular.

          Una molécula de glucosa se convierte en 2 moléculas de piruvato.



Hay una ganancia neta de de dos ATP y dos de NADH


FORMACION DE ACETIL COENZIMA A:






CICLO DE KREBS (DEL ACIDO CITRICO)

         Ocurre en las mitocondrias.

         Entran dos grupos acetilo por cada glucosa.

         Cada grupo acetilo, (2 carbonos) se combina con oxalacetato (4 carbonos) para formar citrato ( 6 carbonos).



El citrato experimenta una serie de reacciones en las que se libera CO2. En el proceso se captura energía en la forma de un ATP, 3 NADH y un FADH2 por cada acetilo.



CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES



         Serie de portadores de electrones incluida en la membrana interna de las mitocondrias de los eucariotes.

         Consta de cuatro complejos o grupos aceptores: flavin mononucleótido, ubiquinona, citocromos.

          Los electrones pasan por la cadena de transporte en una serie de reacciones redox, liberando energía que se almacena en el ATP.

          El último citocromo de la cadena, el citocromo a3, transfiere dos electrones al oxígeno. Al mismo tiempo, los electrones se reúnen con protones del medio formando hidrógeno, el cual, al unirse con el oxígeno, forma agua.



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Membranas Celulares



MEMBRANA PLASMATICA

Se encarga de:

         Intercambio de sustancias



         Comunicación intercelular





         Controla el contenido químico de la célula.

         Importancia: transmisión mensajes.

MOSAICO FLUIDO



CARACTERISTICAS

         Fluida

         Asimétrica

         Semipermeable





TRANSPORTE A TRAVÉS DE MEMBRANA




TRANSPORTE PASIVO

         Difusión de sustancias a través de la    membrana.

          A favor del gradiente de su concentración.

          Puede ser:  difusión simple y difusión facilitada




a) Difusión Simple

1.- A través de la bicapa:



b) Difusión Facilitada

Transporte de pequeñas moléculas polares (aminoácidos, monosacáridos).



Ejem: Movimiento de la glucosa, canales iónicos: impulso nervioso.

CASOS ESPECIALES DE DIFUSIÓN

1.- DIALISIS

          Difusión de un SOLUTO a través de una membrana semipermeable

          El principio tiene muchas aplicaciones prácticas

           Eliminación de sales

          Cambio de tampones

          Concentración de muestras

          Eliminación de solutos de pequeño tamaño



2.- OSMOSIS

         Difusión del agua (SOLVENTE) a través de una membrana semipermeable a favor del gradiente de su concentración.



Cuando la concentración de solutos aumenta, la concentración de agua “libre” disminuye.

          Hipertónica: alta concentración de soluto

          Hipotónica: baja concentración de soluto





TRANSPORTE ACTIVO

         Se realiza contra el gradiente electroquímico.

         También actúan proteínas de membrana.

          Requiere de energía en la forma de ATP.

          Ejem: Bomba de Sodio-Potasio, Bomba de  Calcio

TRANSPORTE MEDIADO POR VESICULAS



1.- ENDOCITOSIS

          Invaginación membrana

         Se conocen tres formas distintas de endocitosis



a) FAGOCITOSIS







Figura 1: se observa un linfocito de trucha en proceso de fagocitar partículas (célula central superior) o con partículas ya fagocitadas (célula inferior derecha con las flechas).




Figura 2: se ve a la derecha un macrófago (célula grande) después de fagocitar partículas, y en la parte inferior izquierda un linfocito B (célula pequeña) también fagocitando partículas.

b) PINOCITOSIS







 
c) ENDOCITOSIS MEDIADA POR RECEPTOR






2.- EXOCITOSIS

            Ejem: células pancreáticas, nerviosas,tiroides,etc






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